Práctica 15: Test rápido para la detección cualitativa de Rotavirus en heces

Test rápido para la detección cualitativa de Rotavirus en heces (23/01/2020)

• Objetivo:

El objetivo que persigue esta técnica es investigar la presencia o no de los antígeno de Rotavirus de manera cualitativa en la muestra de heces humanas.

• Fundamento:

Rotavirus cassette es un test rápido inmunocromatográfico para la detección cualitativa de antígenos de Rotavirus lo que nos sirve de ayuda en el diagnóstico de una posible infección.

En la zona de la línea del test de la membrana se han fijado unos anticuerpos monoclonales frente a a antígenos de Rotavirus. Durante el proceso, la muestra reacciona con partículas que presentan en su superficie anticuerpos anti-Rotavirus. En caso de resultado positivo, los anticuerpos específicos frente presentes en la membrana reaccionarán con la mezcla de conjugado y aparecerán dos líneas en vez de una.

• Materiales:

Entre los materiales que debemos usar para realizar la práctica se encuentran:

1. Cassette (test)
2. Vial de la muestra para su dilución
3. Muestra de heces humanas
4. Papel de filtro
5. Guantes, mascarilla, bata

• Procedimiento:

El procedimiento a seguir es el siguiente:

1. Atemperar la muestra, el vial.
2. Introducir 3 veces el vial en la muestra para una recogida correcta.
3. Cerrar el vial y agitar para la adecuada dilución de la muestra con el líquido diluyente contenido en el vial.
4. Abrir la bolsa del test y etiquetarlo.
5. Dispensar 4 gotas de la dilución en el pocillo marcado con la letra S.
6. Esperar 10 minutos para describir los resultados.

• Resultados:

Resultado test.

En la imagen se puede apreciar la existencia de una sola línea lo que quiere decir que no hay presencia de antígeno de Rotavirus, es decir, resultado negativo.

• Conclusión. Incidencias:

Es una técnica sencilla rápida y en la que hemos ido siguiendo en grupo el protocolo por lo que no hemos tenido ningún error y la hemos entendido que es de lo que se trata.

• Bibliografía:

Clonatest.Test rápido para la detección de antígenos rotavirus.[Internet].[Consultado el 3 de marzo 2020] Disponible en: https://linear.es/ficheros/archivos/CT_45401_Rotavirus_cassette_20t_cas_Rev._02.pdf

Práctica 14: Determinación rápida del antígeno Giardia lamblia

Determinación rápida del antígeno Giardia lamblia (23/01/2020)

• Objetivo:

El objetivo que tiene esta práctica es detectar el antígeno Giardia en muestra de heces humanas, mediante un test rápido.

• Fundamento:

Esta técnica consiste en detectar los antígenos mientras que transcurre con la membrana del test, ya que esta contiene los anticuerpos correspondientes anti-Gardia.

En caso de que se produzca dicha unión, se van a formar dos líneas, lo que nos indicaría un resultado positivo.

• Materiales:

Entres lo materiales que necesitamos para llevar a cabo esta técnica se encuentran:

1. Cassette (test)
2. Muestra de heces humanas
3. Vial para la toma de muestra y dilución
4. Guantes, mascarilla, bata
5. Papel de filtro

• Procedimiento:

Los pasos que debemos seguir son los siguientes:

1. Atemperar el test, vial y la muestra.
2. Desenroscar la parte superior del vial e introducir la varilla varias veces en la muestra.
3. Cerramos el vial y agitamos para homogeneizar y diluir la muestra con el líquido diluyente.
4. Abrimos el cassette, lo sacamos sobre un papel de filtro y lo etiquetamos.
5. Se rompe la parte de arriba del vial.
6. Verter 3 gotas del contenido del vial en el pocillo del test indicado con la letra S.
7. Esperar 10 minutos para realizar la lectura.

• Resultados:

Resultado test.

En la imagen podemos ver que el resultado ha sido negativo ya que únicamente aparece una línea en el área de control lo que también nos indica que el test se encuentra en buenas condiciones.

No es positivo ya que para ello en el otro área debería haber salido otra línea además.

-Resultado positivo:

Imagen tomada de Internet.

En esta imagen si se puede ver la presencia de dos líneas, por el que si se ha detectado el antígeno.

• Conclusión. Incidencias:

Ha sido una práctica que me ha gustado en general como el resto de los test porque son técnicas rápidas, sencillas y muy visuales.

Hemos seguido en grupo todo el protocolo correctamente por lo que no hemos tenido ninguna incidencia y tuvimos en cuenta el dejar el cassette en su bolsa hasta el momento de su uso para evitar posibles contaminaciones.

• Bibliografía:

MonlabTest. Test rápido para la detección de antígenos en Giardia.[Internet].[Consultado 3 de marzo 2020].Disponible en: http://www.monlab.es/document/Muestras%20fecales/IFU%20giardia%20monlabtest.pdf

Práctica 13: Prueba rápida para la detección de antígenos de Helicobacter pylori

Prueba rápida para la detección de antígenos de Helicobacter pylori (23/01/2020)

• Objetivo:

El objetivo principal que persigue esta técnica es detectar de manera cualitativa, posibles antígenos de la bacteria Helicobacter pylori.

• Fundamento:

Este tipo de bacteria es una que infecta el aparato digestivo. La prueba consiste en detectar el antígeno helicobacter pylori a través de una muestra de heces humana. Es una herramienta precisa para el diagnóstico de una infección activa por H. pylori.

• Materiales:

Los materiales requeridos son los siguientes:

1. Cassette del test.
2. Envase para la toma de muestra.
3. Vial de la muestra con diluyente.
4. Heces humanas.
5. Papel de filtro.
6. EPIS.

• Procedimiento:

Los pasos a seguir son:

1. Desenroscar la parte de arriba del vial e introducirla lo más vertical posible hasta 4 veces en la muestra de heces.
2. Cerrar el vial con el tampón y la muestra.
3. Agitar para poder asegurar una buena dispersión.
4. Usar el test dispensando 3 gotas en el pocillo para la muestra (S).
5. Poner en marcha el cronómetro.
6. Realizar la lectura a los 10 minutos.

• Resultados:

El resultado que hemos obtenido:

kit que contiene el vial más el cassette.

Cassette.

Como se puede observar el resultado obtenido ha sido negativo, ya que únicamente aparece una línea en el área de control C, lo que nos indica que no se ha detectado el antígeno H. pylori.

• Conclusión. Incidencias:

Durante el desarrollo de la práctica no ha habido ninguna incidencia ya que se ha leído y seguido el protocolo correctamente.

Ha sido una práctica muy interesante y muy visual y sencilla.

• Bibliografía:

BIONEXIA. Helicobacter pylori Ag.[Internet].[Consultado 28 febrero 2020]. Disponible en: https://www.biomerieux.es/diagnostico-clinico/productos/bionexiar-h-pylori-ag

Práctica 12: Técnica de Ficoll

2º Evaluación

Técnica de Ficoll ( 28/11/2019)

• Objetivo:

El objetivo principal que persigue esta práctica es la observación al microscopio  de las células sanguíneas que son posibles a visualizar a partir de esta técnica. Además se pretende observar las diferentes capas obtenidas junto con su contenido.

• Fundamento:

Esta técnica consiste en la separación celular por gradiente de densidad, y con ello poder separar las células mononucleares de sangre periférica de otras células de la sangre.

Durante la centrifugación lo que ocurre es que se van formando varias capas debido a las distintas densidades. El sedimento está formado por granulocitos y eritrocitos que han migrado a través del medio por presentar una mayor densidad que el Ficoll y por su tendencia a formar agrupaciones.

• Material:

Entre los materiales requeridos para llevar a cabo esta técnica se necesita:

1. Tubos de plástico estéril de 10 ml.
2. Ficoll.
3. Suero fisiológico estéril, 50 ml.
4. Pipetas Pasteur de vidrio.
5. Gradilla.
6. Muestra de sangre con EDTA.
7. Centrífuga.
8. Tinción panóptico.
9. Microscopio.
10. Portaobjeto.
11. EPIS.

• Procedimiento:

Lo pasos que se deben seguir son:

1. Extraer la muestra de sangre de un compañero.
2. Realizar una dilución de sangre y suero salino fisiológico, es decir, dispensar 2 ml de sangre y 2 ml de SSF.
3. Dispensar en un tubo de plástico 3 ml de Ficoll y 4 ml de la dilución anterior con cuidado para que no se mezclen.
4. Centrifugar 1800 rpm durante 25 minutos.
5. Recoger la fracción de leucocitos con la pipeta Pasteur.
6. Realizar una extensión y dejar secar.
7. Teñir la extensión con panóptico rápido.
8. Dejar secar y observar al microscopio.

• Resultados:

Bote de Ficoll

Tubo con tapón de rosca.

En la imagen se puede observar el tubo que contiene los 3 ml de Ficoll mas los 4 ml de la dilución preparada previamente.

Soluciones que componen el Panóptico rápido.

Tubo obtenido tras la centrifugación.

Se puede apreciar que  la capa de Ficoll ya que es menos denso que el sedimento está por encima del mismo. Encima del Ficoll se encuentra otra capa fina formada por las células mononucleares. Finalmente sobre esa, se encuentran las plaquetas y el plasma.

Vista al microscopio

Lo que pudimos observar es eso que pensamos que por su morfología y color pueden ser linfocitos.

• Conclusión. Incidencias:

Ha sido una práctica muy interesante y además sencilla. Durante el desarrollo de la misma no hemos tenido incidencia, simplemente mencionar que a la hora de visualizar al microscopio no logramos ver muchas células con claridad.

• Bibliografía:

Mi laboratorio de inmunología. Técnica Ficoll: Separación celular por gradiente de densidad.[Internet].[Consultado 28 febrero 2020]. Disponible en: http://milaboratoriodeinmunologia.blogspot.com/2017/01/tecnica-de-ficoll-separacion-celular.html

Práctica 11: Determinación de la hormona Gonadotropina Coriónica

Determinación de Gonadotropina Coriónica (21/11/2019)

• Objetivo:

La finalidad que persigue esta técnica es determinar la presencia de esta hormona en la muestra. En el caso nuestro la muestra que hemos usado ha sido la orina de una compañera. 

Como la técnica anterior, se trata de un análisis cualitativo ya que determina la presencia o no de la hormona.

• Fundamento:

Es una prueba rápida de aglutinación en porta para la detección directa de la hormona Gonadotropina Coriónica humana en orina. 

La determinación se efectúa ensayando una suspensión de partículas látex recubiertas con anticuerpos monoclonales anti-hGG, frente a las muestras problema.

• Materiales:

1. Orina de una compañera.
2. Tarjeta con 6 círulos para depositar las muestras.
3. Bote específico para la toma de la muestra.
4. Papel de filtro.
5. Kit con los reactivos: Látex, control positivo y control negativo.
6. Pipetas Pasteur.

• Procedimiento:

El procedimiento consta de varios pasos:

1. Atemperar los reactivos del kit.
2. Depositar 2 gotas de orina en uno de los círculos de la tarjeta y en los adicionales, el control positivo y el negativo.
3. Añadir a cada círculo 1 gota del reactivo hCG-Látex.
4. Con una pipeta desechable realizar la mezcla, de manera que cubra por completo la superficie interior de cada anillo. (Para cada mezcla se deben usar distintas pipetas).
5. Después mover la tarjeta, agitándola durante 2 minutos.
6. Pasado este tiempo, realizar la lectura.

Imagen tomada de Internet:

https://www.beatriztufarmaceutica.com/2018/01/26/como-recoger-una-muestra-de-orina-de-forma-correcta-y-no-fracasar-en-el-intento/ 

El resultado que hemos obtenido ha sido negativo ya que en el pocillo en el que se encuentra la mezcla de la muestra (orina) con el reactivo látex no ha presentado aglutinación.

Por otro lado, la prueba ha sido correcta con el kit correcto ya que el control positivo ha presentado aglutinación.

• Conclusión/Incidencias:

El resultado que hemos obtenido ha sido el esperado viendo lo que el protocolo nos indicaba previamente y durante el procedimiento no ha ocurrido ninguna incidencia.

Fuente bibliográfica:
http://www.linear.es/ficheros/archivos/4120050_hCG_strip_50t_orina_cas_Rev04.pdf

Práctica 10: Determinación de Clamidia

   Determinación de clamidia (15/11/2019)

• Objetivo:

El objetivo de esta práctica es determinar la presencia de esta sustancia en la muestra. En nuestro caso la orina. Es una prueba cualitativa donde simplemente se determina la presencia o no de la sustancia.

• Fundamento:

En una prueba de inmunoensayo de flujo lateral cualitativa para la detección de Chlamydia.

Durante la prueba, la solución extraída del antígeno reacciona con un anticuerpo a clamidia que está recubierto con partículas. La mezcla migra hacia arriba para reaccionar con el anticuerpo a clamidia en la membrana y genera una línea coloreada en la región de la banda de prueba.

• Materiales:

1.  Pipeta de vidrio
2. - Auxiliar de pipeteo
3. - Tubos de ensayo (grandes y pequeños)
4. - Orina
5. - Agua destilada
6. - Vaso precipitado
7. - Gradilla
8. - Cassette
9. - Reactivos A y B
10. - Pipeta Pasteur.

• Procedimiento:

1.  Llenamos 8 tubos de ensayo con 4 mL de orina y 4 mL de agua destilada cada uno, para compensar el equilibrio de la centrífuga.
2. Centrifugamos durante 15 minutos a 3000 r.p.m.
3. Retiramos el sobrenadantey a continuación le añadimos 4 gotas de reactivo A y al final lo homogeneizamos.
4.  Lo vertemos todo en un tubo más pequeño  que es específico del kit y lo dejamos reposar 2 minutos.
5.  Pasado este tiempo añadimos 4 gotas del reactivo B y lo agitamos.
6.  Dejamos reposar 1 minuto.
7.  Añadimos con una pipeta Pasteur 3 gotas de nuestra muestra (orina) en un cassette.
8.  Esperamos 10 minutos y realizamos la correspondiente lectura.

El resultado que se ha obtenido ha sido negativo

Se puede ver que en cada test  que en el control ha salido una línea simplemente,esto quiere decir que el resultado es negativo, es decir, la muestra no contiene esta sustancia.

• Conclusión/incidencias:

Ha sido interesante, nunca había realizado una práctica donde se determinara este tipo de sustancia. 

La hemos repetido dos veces ya que la primera vez en los tubos de ensayos solo depositamos la muestra de orina del compañero pero no agua destilada y por ello hoy la hemos repetido.

Fuente bibliográfica:
http://www.linear.es/ficheros/archivos/4240220_Chlamydia_cassette_20t_cas.pdf

Práctica 9: Determinación de Marihuana

Determinación de Marihuana (14/11/2019)

• Objetivo:

El objetivo perseguido en esta práctica es la detección cualitativa de esta sustancia en una muestra de orina humana.

• Fundamento:

Es un inmunoensayo visual para la detección cualitativa de los metabolitos del THC.

Se basa en el principio de unión competitiva. Las drogas que pueden estar presente en la muestra de orina compite frente al conjugado de droga en los puntos de unión al anticuerpo.

• Materiales:

1. Muestra de orina humana
2. Bote de recogida de orina
3. Cassette
4. Pipeta especial para depositar 3 gotas de la muestra
5. Papel de filtro

• Procedimiento:

El procedimiento es muy sencillo ya que simplemente se parte de un bote de orina del cual con ayuda de la pipeta que viene en el kit se toma 3 gotas y se deposita en el cassette. Al cabo de 5 minutos realizar la lectura y observar la presencia de una línea o dos. En caso de una indica resultado positivo y si hay dos líneas el resultado es negativo.

• Conclusión. Incidencias:

El resultado que hemos obtenido ha sido doble, uno positivo y otro negativo. Durante el proceso no han ocurrido incidencias.

Me ha sorprendido mucho esta práctica ya que nunca antes la había realizado y no imaginaba como se podía hacer.

Fuente bibliográfica:
https://linear.es/ficheros/archivos/4465240_Marijuana_cassette_40t_cas.pdf