Práctica 12: Técnica de Ficoll

2º Evaluación

Técnica de Ficoll ( 28/11/2019)

• Objetivo:

El objetivo principal que persigue esta práctica es la observación al microscopio  de las células sanguíneas que son posibles a visualizar a partir de esta técnica. Además se pretende observar las diferentes capas obtenidas junto con su contenido.

• Fundamento:

Esta técnica consiste en la separación celular por gradiente de densidad, y con ello poder separar las células mononucleares de sangre periférica de otras células de la sangre.

Durante la centrifugación lo que ocurre es que se van formando varias capas debido a las distintas densidades. El sedimento está formado por granulocitos y eritrocitos que han migrado a través del medio por presentar una mayor densidad que el Ficoll y por su tendencia a formar agrupaciones.

• Material:

Entre los materiales requeridos para llevar a cabo esta técnica se necesita:

1. Tubos de plástico estéril de 10 ml.
2. Ficoll.
3. Suero fisiológico estéril, 50 ml.
4. Pipetas Pasteur de vidrio.
5. Gradilla.
6. Muestra de sangre con EDTA.
7. Centrífuga.
8. Tinción panóptico.
9. Microscopio.
10. Portaobjeto.
11. EPIS.

• Procedimiento:

Lo pasos que se deben seguir son:

1. Extraer la muestra de sangre de un compañero.
2. Realizar una dilución de sangre y suero salino fisiológico, es decir, dispensar 2 ml de sangre y 2 ml de SSF.
3. Dispensar en un tubo de plástico 3 ml de Ficoll y 4 ml de la dilución anterior con cuidado para que no se mezclen.
4. Centrifugar 1800 rpm durante 25 minutos.
5. Recoger la fracción de leucocitos con la pipeta Pasteur.
6. Realizar una extensión y dejar secar.
7. Teñir la extensión con panóptico rápido.
8. Dejar secar y observar al microscopio.

• Resultados:

Bote de Ficoll

Tubo con tapón de rosca.

En la imagen se puede observar el tubo que contiene los 3 ml de Ficoll mas los 4 ml de la dilución preparada previamente.

Soluciones que componen el Panóptico rápido.

Tubo obtenido tras la centrifugación.

Se puede apreciar que  la capa de Ficoll ya que es menos denso que el sedimento está por encima del mismo. Encima del Ficoll se encuentra otra capa fina formada por las células mononucleares. Finalmente sobre esa, se encuentran las plaquetas y el plasma.

Vista al microscopio

Lo que pudimos observar es eso que pensamos que por su morfología y color pueden ser linfocitos.

• Conclusión. Incidencias:

Ha sido una práctica muy interesante y además sencilla. Durante el desarrollo de la misma no hemos tenido incidencia, simplemente mencionar que a la hora de visualizar al microscopio no logramos ver muchas células con claridad.

• Bibliografía:

Mi laboratorio de inmunología. Técnica Ficoll: Separación celular por gradiente de densidad.[Internet].[Consultado 28 febrero 2020]. Disponible en: http://milaboratoriodeinmunologia.blogspot.com/2017/01/tecnica-de-ficoll-separacion-celular.html