Reacción de Ouchterlony o doble difusión (24/10/2019)
- Objetivo:
El objetivo de esta práctica es identificar si existe una banda o más de precipitación en la placa para saber si ha habido una unión entre el antígeno y los diferentes sueros (Anticuerpos).
Además con esta práctica se pretende saber realizar correctamente esta técnica que es un tipo de precipitación en gel, técnica de difusión espontánea.
- Fundamento:
En esta técnica lo que se va a trabajar es la relación entre antígeno y anticuerpo cada uno de ellos cargados en los pocillos de una placa para ver si se producen entre ellos bandas de precipitación.
La longitud de la difusión va a ser proporcional a la concentración del antígeno.
- Materiales:
- Placa de Petri
- Balanza
- Vidrio de reloj
- Sueros
- Anti-Ig G
- Pipetas graduadas
- Soporte de pipetas
- Tampón TAE 1X
- Agarosa
- Bote para agarosa
- Pipeta Pasteur de 3 ml.
- Puntas blancas de micropipetas
- Procedimiento:
El procedimiento que hemos seguido ha sido como siempre preparar todo el material necesario.
Pesar en la balanza 0,25 g de agarosa.
Medir 25 ml de tampón TAE.
Mezclar y dejar enfriar en el bote preparado para agarosa.
Después depositar en las placas. Cuando solidifique, hacer los correspondientes pocillos (6 alrededor para sueros(2 mm) y uno central de mayor diámetro(8 mm) para el antígeno).
En cada uno de los pocillos de alrededor han ido los sueros de diferentes personas (10 microlitros) y en el pocillo central el Anti-Ig G (2 gotas).
Las placas finalmente las hemos dejado reposar a 37ºC durante 48 horas para ver los resultados.
Después de las 48 horas hemos podido ver que a penas ha habido difusión. Lo que se debería de ver es una banda de precipitación, de unión entre el antígeno y el anticuerpo.
Algunos de los sueros si han difundido pero el Anti-Ig G no.
Resultados esperados que se hubiera apreciado:
-Fuente:
- Conclusión Incidencias:
Hemos llegado a varias conclusiones tras ver los resultados obtenidos.
Por un lado pensamos que la distancia que hemos establecido entre el pocillo central y los de alrededor es demasiado grande y por eso no ha habido difusión. Pero también creemos que se puede deber a que los reactives no estén en buenas condiciones o que hayamos depositado una cantidad insuficiente de los mismos.
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